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培養(yǎng)基研究中性粒細(xì)胞的堿性磷酸酶染色

　　原理：中性粒細(xì)胞培養(yǎng)基堿性磷酸酶的顯示方法有偶氮偶聯(lián)法和鈣—鈷法兩種。前者的染色原理是血細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶在pH為9.4-9.6的條件下，將基質(zhì)液中的α-磷酸萘酚鈉水解，產(chǎn)生α-萘酚與重氮鹽偶聯(lián)形成灰黑色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶活性所在之處。鈣-鈷法染色是堿性磷酸酶在堿性條件下將基質(zhì)液中的β-甘油磷酸鈉水解，產(chǎn)生磷酸鈉。磷酸鈉依次與硝酸鈣、硝酸鈷、硫化銨發(fā)生反應(yīng)，形成不溶性棕黑色的硫化鉆，定位于酶活性之處。

　　結(jié)果：磷酸醇主要存在于成熟階段的中性粒細(xì)胞(分葉核及桿狀核)，其他血細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。陽性反應(yīng)為胞質(zhì)中出現(xiàn)灰色到棕黑色顆粒，反應(yīng)強(qiáng)度分為5級(jí)，即“—”、“1+”、“2+”、“3+”、“4+”。反應(yīng)結(jié)果以陽性反應(yīng)細(xì)胞百分率和積分值來表示。血涂片染色后，在油漫鏡下，觀察100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞，陽性反應(yīng)細(xì)胞所占百分率即為陽性率；對所有陽性反應(yīng)細(xì)胞逐個(gè)按反應(yīng)強(qiáng)度分級(jí)，將各級(jí)所占的百分率乘以級(jí)數(shù)，然后相加，即為積分值。

    用于亞利桑那沙門氏菌的選擇性分離（SN標(biāo)準(zhǔn)） Salmonella Arizona Agar 亞利桑那菌瓊脂（SA）   100
培養(yǎng)基用于沙門氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)） Rappaport-Vassiliadis Mdeium 氯化鎂孔雀綠肉湯（MM，RV Medium）   250
用于沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(FDA標(biāo)準(zhǔn)) Hektoen Enteric Agar HE 瓊脂（HE）   250
生化培養(yǎng)基，賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)） Lysine-decarboxylase Test Broth 賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基    5
生化培養(yǎng)基，用于細(xì)菌脲酶檢測（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)） Urease Agar Base  尿素酶瓊脂基礎(chǔ)   250
加入尿素酶瓊脂基礎(chǔ) 40%Urea Water 40%尿素水       5ml*10
生化培養(yǎng)基，用于細(xì)菌V-P試驗(yàn)（SN標(biāo)準(zhǔn)） Voges-Proskauer Semisolid Agar V-P 半固體瓊脂    250
生化培養(yǎng)基，用于細(xì)菌靛基質(zhì)試驗(yàn)，亦稱色氨酸肉湯（SN標(biāo)準(zhǔn)） Indole Medium 吲哚培養(yǎng)基       10
吲哚（靛基質(zhì)）試驗(yàn)配套試劑 Kovacs氏靛基質(zhì)試劑盒 10ml*1
生化培養(yǎng)基，用于細(xì)菌丙二酸鹽利用試驗(yàn)（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)） Malonate Broth 丙二酸鈉培養(yǎng)基    10
生化培養(yǎng)基，用于細(xì)菌衛(wèi)予醇發(fā)酵試驗(yàn)（SN標(biāo)準(zhǔn)） Dulcitol Semisolid Agar 衛(wèi)矛醇半固體瓊脂     10
主要用于志賀氏菌的增菌培養(yǎng)，亦可用于沙門氏菌增菌培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)） Gram Negative Enrichment Broth GN 增菌液     250
選擇性培養(yǎng)基，主要用于分離志賀氏菌屬，亦可用于分離沙門氏菌(FDA標(biāo)準(zhǔn)) Xylose Lysine Desoxycholate Medium XLD 培養(yǎng)基       250
用于沙門氏菌的選擇性分離（GB標(biāo)準(zhǔn)） WS Salmonella Agar WS 瓊脂     250
用于志賀氏菌的葡萄糖銨試驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)） Ammonium Dextrose Medium 葡萄糖銨培養(yǎng)基　  250
用于志賀氏菌的復(fù)合生化試驗(yàn)（GB標(biāo)準(zhǔn)） Dextrose Semisolid Medium 葡萄糖半固體培養(yǎng)基    250
用于細(xì)菌的復(fù)合生化試驗(yàn) Motility Indol Urea Medium Base 動(dòng)力-吲哚-尿素培養(yǎng)基基礎(chǔ)(MIU)  250
用于硫化氫試驗(yàn) Lead Acetate Medium 醋酸鉛培養(yǎng)基   250
用于硫化氫、動(dòng)力、吲哚試驗(yàn) Hydrogen Sulfide Indole Motility Medium SIM培養(yǎng)基   250

　　臨床意義：培養(yǎng)基NAP活性可因年齡、性別、應(yīng)激狀態(tài)、月經(jīng)周期、妊娠及分娩等因素有一定的生理性變化。在病理情況下，NAP活性的變化常有助于某些疾病的診斷和鑒別診斷。